Olympus - TIRFM

Műszer/rendszer neve: ­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­ Olympus - TIRF fluoreszcencia mikroszkóp

Műszer fizikai helye:

Élettudományi Központ, 2.045 Műszerszoba

Szervezeti Egység:

Damjanovich Sándor Sejtanalitikai Szolgáltató Labor, DE ÁOK Biofizikai és Sejtbiológiai Intézet

Műszerfelelős: Dr. Mocsár Gábor

Hozzáférés feltételei: A készülék használata a műszerfelelőssel történő egyeztetést követően lehetséges. A műszert csak a hozzá kapcsolódó specifikus oktatáson való részvételt követően engedélyezett használni.

Hozzáférési feltételeket, szolgáltatások árát tartalmazó honlap: link

Műszer specifikációi:

A mikroszkóp 4 lézerrel van ellátva (405, 491, 561, 647 nm). Az Andor iXon 897 EMCCD kamerával 20 ms-onként lehet képet rögzíteni. A mikroszkóp optikai osztóval van ellátva, melynek segítségével egyidejűleg lehet spektrálisan szeparált (pl. zöld és vörös) képeket felvenni a kamera CCD chipjének két felén. A vizsgálati rétegvastagság (az evaneszcens mező behatolási mélysége) automatikusan beállítható a beesési szög változtatásával mindegyik lézervonal esetén.

Műszer rövid ismertetése:

A teljes belső visszaverődéses fluoreszcencia mikroszkópia (total internal reflection fluorescence microscopy) sejtmembrán, membránközeli sejtorganellumok, fedőlemezre kitapadó minták sepcifikus, nagy érzékenységű vizsgálatára alkalmas módszer. A nagy NA-val rendelkező objektívből a gerjesztő fény a határszögnél nagyobb szögben érkezik az üveg-víz (fedőlemez-minta) határfelületre, így ott teljes visszaverődést szenved. A visszaverődés helyén megjelenő, exponenciálisan lecsengő ún. evaneszcens mező azonban a minta határfelületéhez közel eső rétegben lévő festékeket gerjesztheti (~100-200 nm mélységig), de a minta belsőbb rétegeibe nem jut el. Így pl. a sejtmembránból specifikus fluoreszcencia jelet kaphatunk igen alacsony háttér mellett. A módszer a konfokális mikroszkópiáét jelentősen meghaladó érzékenységgel rendelkezik felületvizsgálati alkalmazásokban (ligandkötődés, internalizáció, membránfehérjék és lipidek vizsgálata, stb.).

Mérési lehetőségek felsorolása:

• fixált és élősejtes mintában egyedi molekula detektálás
• intracellular trafficking
• kolokalizáció analízis
• TIRF (total internal reflection fluorescence) képalkotás
• többcsatornás fluoreszcencia képalkotás

Kép a műszerről: