Magreceptorok dimerizációjának és DNS-kötésének térképezése élő sejtekben egy továbbfejlesztett mikroszkópos módszerrel

Rehó Bálint, Mocsár Gábor, Lina Fadel, Brázda Péter, Nagy László, Vámosi György és németországi munkatársaik, Lukas Lau, Gabriele Müller és Tóth Katalin egy közösen továbbfejlesztett mikroszkópos módszerrel élő sejtekben vizsgálták a transzkripciót szabályozó magreceptorok dimerizációját és DNS-hez való kötődését. A módszer (SPIM-FRET-FCCS) segítségével a sejt kiválasztott síkjában egyidejűleg térképezhető a fluoreszcensen megjelölt molekulák közelsége (Förster rezonancia energia transzfer, FRET segítségével), együttmozgása és mobilitása (fluoreszcencia keresztkorrelációs spektroszkópia, FCCS révén), így alkalmas fehérje-fehérje és fehérje-DNS kölcsönhatások egyidejű vizsgálatára. A magreceptorok családjába tartozó retinsav receptor (RAR) a DNS-hez kötődve ligandfüggő módon szabályozza célgénjeinek átíródását, és számos betegségben terápiás célpontként szolgál. A mikroszkópos módszer segítségével igazolták, hogy agonista ligand hatására az RAR dimerizációja erősödik a retinoid X receptorral, és a dimer DNS-kötődése is fokozódik. A cikket az Analytical Chemistry folyóiratban közölték doi: 10.1074/jbc.RA119.011614 (IF: 6.78).

Ábra: Demonstrating the distinction of coexpressed protein pairs based on their proximity and co-mobility. Left: 2D maps of proximity (E: FRET efficiency) and co-mobility (rCCF: apparent co-diffusing fraction) measured from a GFP-mCherry fusion protein (GC+) connected by a short linker. Right: Cellular median values distinguishing high FRET, high comobility (GC+), low FRET high comobility (GC-: dyes connected by a long linker) and low FRET, low co-mobility (G/C: separately expressed dyes) populations.